兼并引物PCR
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兼并引物PCR(degenerate primer PCR),别名简并引物PCR,是指用设计引物的方法来扩增所有已知顺序核苷酸序列的PCR法。因为密码子具有兼并性,为了扩增一些已知编码顺序的核酸序列,可通过设计兼并引物进行扩增。
兼并引物代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物;兼并度越低,产物特异性越强。设计引物时应选择兼并性小的氨基酸,避免引物3’末端兼并(因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR),并使用次黄嘌呤降低退火温度。
该技术自20世纪90年代起应用于医学检测、微生物学、植物病理学和基因克隆等领域,如1994年检测HPV、克隆甘油合成酶基因等;2023年建立了香石竹斑驳病毒属的检测方法。技术演进结合了RACE技术、Smart RACE技术等方法。
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