积层胶

积层胶

积层胶是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的关键组件，由Ornstein和Davis于1964年设计，Laemmli在1970年引入SDS后完善体系 。它也被称为积层凝胶、堆积胶、浓缩胶或成层胶 。

积层胶通过pH6.8的Tris-Cl缓冲液与pH8.8的分离胶构成不连续缓冲系统，利用离子强度差异形成移动界面，压缩蛋白质样品成狭窄区带，提升后续分离精度 。其作用原理基于在pH6.7的浓缩胶中，甘氨酸解离很少、泳动速率低，而氯离子泳动速率高，蛋白质介于两者之间，形成导电性较低的区带，产生高电压梯度，从而将蛋白质浓缩成狭窄区带 。积层胶在Western blot技术中与分离胶协同使用，完成蛋白质分离后经电转移至硝酸纤维素膜检测。制备过程涉及丙烯酰胺聚合反应，需使用30%丙烯酰胺溶液、TEMED催化剂，TEMED需最后添加，并需防护神经毒性物质 。灌胶后需插入样品梳并让凝胶凝固，凝固时间约为20-30分钟或30-45分钟 。浓度选择依据目标蛋白分子量，如分离260kD蛋白时采用3.5%积层胶 。染色环节通过丽春红S或酶联显色法实现目标蛋白可视化检测。

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